Банникова Василиса Михайловна
Ореховый б-р, д. 49, корп. 1, Москва 115580
Vasilisa M. Bannikova
49 corp. 1 Orekhovyy Blvd, Moscow 115580
Сеидкулиева Адамиана Аманмамедовна, к.м.н.
WoS ResearcherID: ABF-4016-2021. Scopus Author ID: 57226686283
Ореховый б-р, д. 49, корп. 1, Москва 115580
Adamiana A. Seidkulieva, PhD
WoS ResearcherID: ABF-4016-2021. Scopus Author ID: 57226686283
49 corp. 1 Orekhovyy Blvd, Moscow 115580
Панов Юрий Михайлович
Scopus Author ID: 57210412012
Ореховый б-р, д. 49, корп. 1, Москва 115580
Yuri M. Panov
Scopus Author ID: 57210412012
49 corp. 1 Orekhovyy Blvd, Moscow 115580
Каргин Иван Денисович
Ореховый б-р, д. 49, корп. 1, Москва 115580
Ivan D. Kargin
49 corp. 1 Orekhovyy Blvd, Moscow 115580
Бочков Павел Олегович, к.б.н.
Ореховый б-р, д. 49, корп. 1, Москва 115580
Pavel O. Bochkov, PhD
49 corp. 1 Orekhovyy Blvd, Moscow 115580
Background. Generating a sensitive and selective method to quantitate valproic acid (VPA) for therapeutic drug monitoring, using as low as 50 µl of blood serum sample, is highly relevant for pediatric patients, for whom biomaterial collection can be challenging.
Objective: To develop and validate a method to quantitate VPA level in blood serum using gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) without derivatization, added with phenylacetic acid as an internal standard (IS), for therapeutic drug monitoring, and to comparatively analyze results obtained using developed method and immunochemical approach.
Material and methods. Extraction of VPA and IS was performed using liquid-liquid extraction with ethyl acetate, after preacidification of blood serum sample with 1 M hydrochloric acid. The lower limit of quantification was 5 µg/ml, with calibration range 5–200 µg/ml. The study employed a GC-MS system consisting of Agilent 5977B SQ single quadrupole MS-detector equipped with a high-efficiency source for electron impact ionization, and Agilent 7890 gas chromatograph (both – Agilent Technologies, USA). Analytes were quantitated by using electron impact ionization in selected ion monitoring mode. For VPA, the characteristic fragment ion with mass-to-charge ratio (m/z) 102 was used, and for IS – most intense characteristic fragment ion with m/z 91. Chromatographic separation was carried out on HP-5MS Ultra Inert column (30 m × 250 µm × 0.25 µm) (Agilent Technologies, USA).
Results. A comparative analysis of the results obtained in determining VPA level in blood serum samples using GC-MS and immunochemical method demonstrated a high degree of correlation, thereby verifying feasibility of the developed method for therapeutic drug monitoring.
Conclusion. The developed GC-MS method is characterized by high sensitivity and selectivity and can be recommended for introduction into clinical practice for therapeutic drug monitoring of VPA concentration as an alternative to immunochemical approach.
Актуальность. Создание чувствительного и селективного метода определения концентрации вальпроевой кислоты (ВК) для терапевтического лекарственного мониторинга с использованием для анализа всего 50 мкл сыворотки крови особенно актуально для детей, у которых взятие биоматериала может вызывать трудности.
Цель: разработка и валидация методики количественного определения ВК в сыворотке крови методом газовой хроматографии с масс-спектрометрией (ГХ-МС) без дериватизации с добавлением фенилуксусной кислоты в качестве внутреннего стандарта (ВС) для терапевтического лекарственного мониторинга, проведение сравнительного анализа результатов, полученных с помощью разработанного и иммунохимического методов.
Материал и методы. Извлечение ВК и ВС проводили с помощью жидкостно-жидкостной экстракции этилацетатом с предварительным подкислением сыворотки крови 1 М раствором соляной кислоты. Нижний предел количественного определения составил 5 мкг/мл, диапазон концентраций – от 5 до 200 мкг/мл. В работе использовали систему ГХ-МС, состоящую из моноквадрупольного МС-детектора Agilent 5977B SQ, оснащенного высокоэффективным источником ионизации электронным ударом, и газового хроматографа Agilent 7890 (оба – Agilent Technologies, США). Количественное определение исследуемых веществ выполняли при ионизации электронным ударом с использованием режима сканирования «мониторинг выбранных ионов». Для ВК применяли характеристичный фрагментный ион с отношением массы к заряду (m/z) 102, для ВС – характеристичный фрагментный ион наибольшей интенсивности с m/z 91. Хроматографическое разделение осуществляли на колонке HP-5MS Ultra Inert 30 м × 250 мкм × 0,25 мкм (Agilent Technologies, США).
Результаты. Сравнительный анализ результатов, полученных при определении содержания ВК в образцах сыворотки крови с помощью ГХ-МС и иммунохимического метода, продемонстрировал высокую степень корреляции. Показана пригодность разработанного метода для терапевтического лекарственного мониторинга.
Заключение. Разработанная методика ГХ-МС характеризуется высокой чувствительностью и селективностью и может быть рекомендована для внедрения в клиническую практику в рамках терапевтического лекарственного мониторинга концентрации ВК как альтернатива иммунохимическому методу.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.