ул. Советская, 4, Тверь 170100, Россия
ординатор кафедры фармакологии, клинической фармакологии, ФГБОУ ВО Тверской государственный медицинский университет Минздрава России
4 Sovetskaya Str., Tver 170100, Russia
Resident-in-Training, Chair of Pharmacology & Clinical Pharmacology, Tver State Medical University
ул. Советская, 4, Тверь 170100, Россия
ассистент кафедры фармации, ФГБОУ ВО Тверской государственный медицинский университет Минздрава России
4 Sovetskaya Str., Tver 170100, Russia
Assistant, Chair of Pharmacy, Tver State Medical University
ул. Советская, 4, Тверь 170100, Россия
д. м.н., профессор, заведующая кафедрой фармации, ФГБОУ ВО Тверской государственный медицинский университет Минздрава России. Тел.: +7(4822)53-86-55
4 Sovetskaya Str., Tver 170100, Russia
MD, Professor & Head, Chair of Pharmacy, Tver State Medical University. Tel.: +7(4822)53-86-55
ул. Советская, 4, Тверь 170100, Россия
к. б.н., доцент кафедры фармации, ФГБОУ ВО Тверской государственный медицинский университет Минздрава России
4 Sovetskaya Str., Tver 170100, Russia
PhD (Biology), Associate Professor, Chair of Pharmacy, Tver State Medical University
Aim: to adapt the HPLC-MS/MS technique to determining valproic acid and its metabolites in blood plasma for drug therapy monitoring.
Materials and Methods: The chromatographic assay was run using an Agilent 1260 Infinity II chromatograph with a Phenomenex synergi Fusion analytical column 4 μm-C18 2×50 mm. The mobile phase consisted of 0.1% ammonium acetate in distilled water and 0.1% ammonium acetate in methanol (10:90 v/v, 0.5 ml/min). The multiple ions monitoring (MIM) mode was used for mass- spectrometric detection of valproic acid at m/z = 143.1, with the negative ion mode. The method was found applicable over the range from 1 mcg/ml to 200 mcg/ml of valproic acid. For the mass spectroscopy detection of valproic acid metabolites, the multiple reaction monitoring (MRM mode) was used. MS identifications of 2-propyl-4-pentanoil-β-О-glucuronide; 2-propyl-4-pentenoic acid, 3-hydroxy-2- propylpentanoic acid, 4-hydroxy-2-propylpentanoic acid, 2-propylglutaric acid and 3- oxo-2-propylpentanoic acid in the negative ion mode were carried out at m/z 319.2→143.2; m/z 140.1→140.1; m/z 159.1→101; m/z 159.1→123.1; m/z 173→129.1 and m/z 157.05→11, respectively. The method was sensitive over the range from 10 ng/ml to 500 ng/ml of the tested compounds.
Results: The developed technique allows for determining valproic acid and its metabolites in a single sample; thus, the preliminary stage of separate sample preparation can be omitted, which increases the informative value of the assay without increasing its cost.
Conclusion: This innovative methodology for the quantification of valproic acid and its metabolites in the blood plasma is expected to facilitate the individual approach to the treatment of patients with epilepsy, thereby increasing the efficacy and safety of the pharmacotherapy.
Цель – разработка методики ВЭЖХ-МС/МС определения вальпроевой кислоты и ее метаболитов в плазме крови для терапевтического лекарственного мониторинга.
Материалы и методы. Хроматографию выполняли с использованием хроматографа Agilent 1260 Infinity II (аналитическая колонка Phenomenex synergi Fusion 4 мкм-C18 2×50 мм). В качестве подвижной фазы использовали смесь метанола и воды деионизированной в соотношении 90:10 с добавлением 0,1% аммония ацетата в изократическом режиме, скорость потока подвижной фазы – 0,5 мл/мин. Масс-спектрометрическую идентификацию вальпроевой кислоты осуществляли при отрицательной поляризации в режиме регистрации множественных ионов (MIM) по значению m/z 143,1. Диапазон применения методики составил от 1 до 200 мкг/мл. Масс-спектрометрическую идентификацию 2-пропил-4-ентаноил- β-О-глюкуронида, 2-пропил-4-пентеновой, 3-гидрокси-2- пропилпентановой, 4-гидрокси-2-пропилпентановой, 2-пропилпентандиовой и 3-оксо-2-пропилпентановой кислот осуществляли при отрицательной поляризации по значению MRM-переходов: m/z 319,2→143,2; m/z 140,1→140,1; m/z 159,1→101; m/z 159,1→123,1; m/z 173→129,1; 157,05→113 соответственно. Аналитический диапазон методики определения метаболитов составил 10-500 нг/мл.
Результаты. Разработанная методика позволяет определять вальпроевую кислоту и ее метаболиты в одной пробе без отдельной пробоподготовки, что увеличивает информативность исследования без повышения его стоимости.
Заключение. Внедрение методики количественного определения вальпроевой кислоты и ее метаболитов в плазме крови в работу клинических лабораторий позволит обеспечить индивидуальный подход к лечению пациентов с эпилепсией, тем самым повысив эффективность и безопасность фармакотерапии.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.